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活性氧含量的測(cè)定檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-15 12:13:25 更新時(shí)間：2025-05-14 12:13:26

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

活性氧含量的測(cè)定檢測(cè)概述

活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）是生物體內(nèi)一類具有高反應(yīng)活性的含氧分子或自由基的總稱，包括超氧陰離子（O??）、過氧化氫（H?O?）、羥基自由基（·OH）等。它們?cè)诩?xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、免疫防御等生理過程中發(fā)揮重要作用，但過量積累會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激，引發(fā)DNA損傷、蛋白質(zhì)變性及脂質(zhì)過氧化，進(jìn)而與衰老、癌癥、神經(jīng)退行性疾病等密切相關(guān)。因此，準(zhǔn)確測(cè)定活性氧含量對(duì)于疾病機(jī)制研究、藥物篩選及抗氧化劑開發(fā)具有重要意義。

活性氧含量的測(cè)定需綜合考慮其種類、存在形式及檢測(cè)環(huán)境的復(fù)雜性。現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)主要通過化學(xué)探針、熒光標(biāo)記、光譜分析和電化學(xué)方法實(shí)現(xiàn)。以下從檢測(cè)項(xiàng)目、儀器、方法及標(biāo)準(zhǔn)等方面展開詳細(xì)說明。

檢測(cè)項(xiàng)目

活性氧檢測(cè)通常針對(duì)以下幾類物質(zhì)：
1. 過氧化氫（H?O?）：作為ROS的中間產(chǎn)物，廣泛參與氧化還原反應(yīng)。
2. 超氧陰離子（O??）：線粒體呼吸鏈的主要副產(chǎn)物，易引發(fā)連鎖氧化反應(yīng)。
3. 羥基自由基（·OH）：最具破壞性的ROS，需快速檢測(cè)以避免樣本降解。
4. 總活性氧水平：綜合評(píng)估樣本氧化狀態(tài)，常用于細(xì)胞或組織整體分析。

檢測(cè)儀器

常用儀器包括：
1. 分光光度計(jì)：通過比色法檢測(cè)探針顯色反應(yīng)，適用于H?O?定量。
2. 熒光顯微鏡/酶標(biāo)儀：利用DCFH-DA等熒光探針實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS可視化及定量。
3. 電子順磁共振儀（EPR）：直接捕捉自由基信號(hào)，特異性高但設(shè)備成本較高。
4. 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC-MS）：用于復(fù)雜樣本中特定ROS的精準(zhǔn)分析。

檢測(cè)方法

主要檢測(cè)方法包括：
1. 化學(xué)比色法：如硫代巴比妥酸（TBA）法檢測(cè)脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA。
2. 熒光探針法：DHE（檢測(cè)O??）、DCFH-DA（廣譜ROS指示劑）等探針標(biāo)記后定量。
3. 電子自旋共振（ESR）：通過自旋捕捉劑（如DMPO）捕獲自由基后分析譜圖。
4. 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：針對(duì)特定ROS代謝產(chǎn)物進(jìn)行高靈敏度定量。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

活性氧檢測(cè)需遵循以下標(biāo)準(zhǔn)：
1. ISO 21427：規(guī)定水樣中H?O?的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)流程。
2. ASTM E2148：規(guī)范熒光法測(cè)定食品中總抗氧化能力的實(shí)驗(yàn)條件。
3. 《中國(guó)藥典》2020版：收錄DPPH自由基清除率測(cè)定法用于抗氧化劑評(píng)價(jià)。
4. GB/T 37841-2019：細(xì)胞氧化應(yīng)激檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化操作指南。

不同方法需根據(jù)樣本類型（如細(xì)胞、體液或環(huán)境樣品）、檢測(cè)靈敏度和設(shè)備條件進(jìn)行選擇，同時(shí)需嚴(yán)格質(zhì)控（如添加內(nèi)標(biāo)、設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照）以確保數(shù)據(jù)可靠性。