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傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 06:45:24 更新時(shí)間：2025-05-13 06:45:25

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）檢測(cè)的重要性

傳染性造血器官壞死病毒（Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV）是一種嚴(yán)重危害鮭科魚類（如鮭魚、鱒魚）的病原體，主要引發(fā)傳染性造血器官壞死?。↖HN）。該病以高死亡率（尤其幼魚）、全身性出血和造血組織壞死為特征，對(duì)全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。IHNV的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)是防控疾病傳播、保障養(yǎng)殖安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。早期診斷不僅能降低疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，還能減少抗生素濫用，促進(jìn)生態(tài)友好型水產(chǎn)管理。

檢測(cè)項(xiàng)目

IHNV檢測(cè)的核心項(xiàng)目包括：
1. 病毒分離與鑒定：通過細(xì)胞培養(yǎng)法分離病毒，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。
2. 病毒抗原檢測(cè)：利用免疫學(xué)方法（如ELISA、免疫熒光）直接檢測(cè)組織或體液中的病毒蛋白。
3. 核酸檢測(cè)：通過RT-PCR、qRT-PCR或基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)病毒RNA。
4. 抗體檢測(cè)：分析魚體內(nèi)特異性抗體的存在，評(píng)估群體免疫狀態(tài)。

檢測(cè)儀器

常用檢測(cè)儀器包括：
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（qPCR）：用于病毒核酸定量分析，靈敏度高。
- 熒光顯微鏡：觀察免疫熒光標(biāo)記的病毒抗原。
- 酶標(biāo)儀：配合ELISA試劑盒進(jìn)行批量樣本檢測(cè)。
- 電泳系統(tǒng)：驗(yàn)證PCR產(chǎn)物的特異性。
- 細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備：病毒分離需使用特定細(xì)胞系（如EPC、CHSE-214細(xì)胞）。

檢測(cè)方法

主要檢測(cè)技術(shù)及流程：
1. RT-PCR法：
- 提取樣本（腎臟、脾臟）RNA。
- 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，擴(kuò)增病毒特異性基因（如G蛋白基因）。
- 凝膠電泳或熒光探針判定結(jié)果。
2. 病毒分離法：
- 組織勻漿處理后接種敏感細(xì)胞系。
- 觀察CPE（細(xì)胞圓縮、脫落），配合中和試驗(yàn)確認(rèn)。
3. ELISA檢測(cè)：
- 包被IHNV單克隆抗體，捕獲樣本中的抗原。
- 酶標(biāo)記二抗顯色，通過吸光度值判斷陽性。
4. 免疫熒光技術(shù)（IFA）：
- 固定感染細(xì)胞，加入熒光標(biāo)記抗體。
- 熒光顯微鏡下觀察特異性熒光信號(hào)。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

IHNV檢測(cè)需遵循國(guó)際與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：
- OIE標(biāo)準(zhǔn)：《水生動(dòng)物衛(wèi)生法典》規(guī)定病毒分離、PCR或抗體檢測(cè)為確診依據(jù)。
- 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 15805.2-2018《魚類檢疫方法第2部分：傳染性造血器官壞死病毒》詳細(xì)規(guī)范檢測(cè)流程。
- 行業(yè)規(guī)范：SN/T 1674-2013《傳染性造血器官壞死病檢疫技術(shù)規(guī)范》明確樣本采集、保存及結(jié)果判定要求。

檢測(cè)過程中需注意生物安全，避免交叉污染。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過能力驗(yàn)證，并定期校準(zhǔn)設(shè)備以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。結(jié)合流行病學(xué)特征與檢測(cè)結(jié)果，可制定針對(duì)性的防控策略。