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狂犬病檢疫檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 03:29:33 更新時(shí)間：2025-05-13 03:29:37

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

狂犬病檢疫檢測(cè)的重要性

狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）引起的一種人畜共患傳染病，主要通過被感染動(dòng)物（如犬、貓、蝙蝠等）的唾液經(jīng)咬傷或抓傷傳播。該病潛伏期長(zhǎng)、致死率接近100%，是全球公共衛(wèi)生領(lǐng)域的重大威脅之一?？袢z疫檢測(cè)是預(yù)防疫情擴(kuò)散、保障人類和動(dòng)物健康的核心手段，其目標(biāo)包括：早期診斷感染病例、確認(rèn)病毒是否存留于宿主體內(nèi)、評(píng)估免疫接種效果，以及為流行病學(xué)調(diào)查提供數(shù)據(jù)支持。檢測(cè)工作需在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室開展，涉及多種技術(shù)手段和標(biāo)準(zhǔn)化流程，覆蓋動(dòng)物活體檢測(cè)、死后病理檢查及疫苗效力驗(yàn)證等環(huán)節(jié)。

狂犬病檢測(cè)的核心項(xiàng)目

狂犬病檢疫檢測(cè)主要包括以下幾類項(xiàng)目：

1. 病毒抗原檢測(cè)：通過熒光抗體試驗(yàn)（FAT）或免疫組化法（IHC）檢測(cè)動(dòng)物腦組織中的病毒抗原，是死后確診的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

2. 病毒核酸檢測(cè)：采用RT-PCR或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)唾液、腦脊液或腦組織樣本中的病毒RNA，適用于早期診斷和活體檢測(cè)。

3. 抗體水平檢測(cè)：通過血清中和試驗(yàn)（如RFFIT）或ELISA法評(píng)估人或動(dòng)物體內(nèi)的中和抗體滴度，用于疫苗接種效果評(píng)價(jià)。

4. 病毒分離培養(yǎng)：將樣本接種小鼠或細(xì)胞系（如BHK-21細(xì)胞）進(jìn)行病毒擴(kuò)增，用于毒株分型和溯源研究。

5. 組織病理學(xué)檢查：通過顯微鏡觀察腦組織中的內(nèi)基氏小體（Negri bodies），輔助診斷。

關(guān)鍵檢測(cè)儀器設(shè)備

檢測(cè)過程中需使用以下核心儀器：

· 熒光顯微鏡：用于觀察熒光標(biāo)記的病毒抗原

· 實(shí)時(shí)熒光PCR儀：實(shí)現(xiàn)病毒RNA的快速擴(kuò)增與定量分析

· 酶標(biāo)儀：配套ELISA試劑盒進(jìn)行抗體或抗原的批量檢測(cè)

· 生物安全柜：確保病毒分離操作符合生物安全三級(jí)（BSL-3）要求

· 細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：用于病毒分離和中和試驗(yàn)的細(xì)胞維持

主要檢測(cè)方法及流程

直接熒光抗體法（DFA）：
樣本經(jīng)冷凍切片固定后，加入熒光標(biāo)記的抗狂犬病病毒單克隆抗體，通過熒光顯微鏡觀察特異性熒光信號(hào)。該方法敏感性達(dá)95%以上，可在2-4小時(shí)內(nèi)完成。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）：
提取樣本RNA后，通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，利用特異性引物擴(kuò)增病毒核酸片段。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可同時(shí)實(shí)現(xiàn)病毒載量測(cè)定，檢測(cè)靈敏度可達(dá)10拷貝/μL。

快速熒光灶抑制試驗(yàn)（RFFIT）：
將待測(cè)血清與標(biāo)準(zhǔn)病毒混合后接種敏感細(xì)胞，通過熒光抗體染色評(píng)估中和抗體效價(jià)，是WHO推薦的疫苗效力評(píng)價(jià)方法。

國(guó)內(nèi)外檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)體系

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：
世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)手冊(cè)》明確規(guī)定了DFA、RT-PCR和病毒分離的操作規(guī)范，要求實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)符合生物安全三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)：
· GB 17015-2020《狂犬病診斷標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定臨床診斷與實(shí)驗(yàn)室確診標(biāo)準(zhǔn)
· WS 281-2008《狂犬病診斷標(biāo)準(zhǔn)》詳細(xì)描述各檢測(cè)方法的操作流程
· NY/T 541-2023《動(dòng)物狂犬病檢疫技術(shù)規(guī)范》規(guī)范動(dòng)物檢疫程序

所有檢測(cè)均需在經(jīng)認(rèn)證的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，陽性樣本需通過至少兩種不同原理的方法復(fù)核確認(rèn)。檢測(cè)結(jié)果需結(jié)合流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)綜合判斷，確保檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。