SHIVSF162P3陰道途徑感染恒河猴模型
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發(fā)布時(shí)間:2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間:2025-07-25 08:14:04
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作者:中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心
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資源中文名稱 | SHIVSF162P3陰道途徑感染恒河猴模型 |
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資源英文名稱 | Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIVSF162P3 |
疾病概述 | 艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害為特征的傳染性疾病,是20世紀(jì)危害人類(lèi)健康和生命最嚴(yán)重的病毒性疾病之一。自美國(guó)CDC報(bào)道首例艾滋病后,到20世紀(jì)80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個(gè)全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690萬(wàn)人,2014年新增感染者200萬(wàn),2014年因艾滋病死亡120萬(wàn)人。艾滋病在1985年傳入我國(guó),截至2015年5月31日,全國(guó)歷年累計(jì)報(bào)告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會(huì)熱點(diǎn)問(wèn)題,艾滋病的預(yù)防與治療也成為當(dāng)代生物醫(yī)學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn)之一。 |
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息 | 恒河猴又名孟加拉猴、狝猴或廣西猴。學(xué)名為(Macaca mulatta),英文名rhesus macaque。分類(lèi)所屬為哺乳綱(Mammalia),靈長(zhǎng)目(Primates),人猴猿亞目(Anthopoidea),猴科(Cercopithecidae),狝猴屬(Macaca)。月經(jīng)周期為28(1-4)天,發(fā)情期為11-12個(gè)月,懷孕期163天,產(chǎn)仔期3-6個(gè)月,胎產(chǎn)仔1-2只,出生重250-380g,哺乳期3-7個(gè)月。 狝猴屬中,恒河猴使用最廣。因分子生物學(xué)進(jìn)展,栗色狝猴用于生理、生化、遺傳、血型及免疫等方面的研究更多,病理研究也不少,常用于醫(yī)療和藥物實(shí)驗(yàn)等。 在生物學(xué)研究方面可用于生理學(xué)、心理學(xué)、遺傳學(xué)的各種研究。 在生理學(xué)研究方面可用于腦功能、血液循環(huán)、呼吸生理、生殖生理、內(nèi)分泌和老年學(xué)等各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。 在醫(yī)學(xué)研究方面可用于感染人類(lèi)所特有的傳染病,特別是其他動(dòng)物不能的傳染病 藥物學(xué)研究方面,預(yù)防小兒麻痹的糖丸,恒河猴是唯一的試驗(yàn)對(duì)象 ,人類(lèi)避孕藥物的研究,用恒河猴作試驗(yàn)是極為理想的,此外,恒河猴還常用于放射病出血和骨髓移植的實(shí)驗(yàn)。 (一)傳染病學(xué)研究 (二)藥理學(xué)和毒理學(xué)研究 (三)生殖生理研究 (四)口腔醫(yī)學(xué)研究 (五)行為學(xué)和高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)研究 (六)營(yíng)養(yǎng)、代謝研究 (七)老年病研究 (八)器官移植和眼科研究 (九)內(nèi)分泌病和畸胎學(xué)研究 (十)腫瘤學(xué)和環(huán)保研究 20世紀(jì)60年代出版的《狝猴文獻(xiàn)錄》中,涉及論文的多達(dá)五百余篇;在12種狝猴中,使用栗色狝猴的幾乎占一半;試加分析,解剖文章占半數(shù),生理學(xué)和生態(tài)學(xué)其次,再次是分類(lèi)、地理分布、胚胎、進(jìn)化、遺傳和生化病理各有二十余篇,最少的是古生物和畜養(yǎng)、管理的文章。 |
模型制作方法 |
1、 實(shí)驗(yàn)用病毒:感染毒株為SHIVSF162p3中國(guó)恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株,中國(guó)恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度為1×104 TCID50/mL。 2、 感染動(dòng)物:選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實(shí)驗(yàn)前體檢無(wú)異常,必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴細(xì)胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相關(guān)的4種基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)篩查結(jié)果為陰性。所有感染動(dòng)物必須在ABSL-3室中進(jìn)行。 3、 感染方法:將麻醉好的實(shí)驗(yàn)猴放在操作臺(tái)上,動(dòng)物采取俯臥位,后肢抬高,暴露陰道口。用2mL預(yù)冷的無(wú)菌PBS清洗陰道。再將稀釋好的適當(dāng)濃度的病毒液1mL緩慢推入。實(shí)驗(yàn)猴保持此姿勢(shì)30min。 4、 SHIVSF162p3陰道感染猴樣品采集和指標(biāo)測(cè)定:感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3,間隔4-7d,進(jìn)行陰道感染。在每次感染前及13次感染結(jié)束后,采EDTA抗凝血3mL,分別測(cè)定外周血CD4+/CD8+比值及血漿病毒載量。 5、 SHIVSF162p3陰道感染猴血漿病毒載量的測(cè)定:提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA,使用SYBR Green I 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法測(cè)定血漿病毒載量。 6、 SHIVSF162p3陰道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對(duì)數(shù)測(cè)定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標(biāo)記EDTA抗凝全血淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞儀測(cè)定CD4+/CD8+比值,并根據(jù)血常規(guī)結(jié)果,計(jì)算出CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。 |
模型表型數(shù)據(jù) |
1、SHIVSF162p3陰道感染恒河猴外周血病毒載量結(jié)果 6只實(shí)驗(yàn)猴都先后出現(xiàn)了血漿病毒載量(圖1)。1-1感染后27d出現(xiàn)載量,37d達(dá)到高峰(6.498×107copies/mL),57d載量檢測(cè)陰性消失,但在85d載量再次出現(xiàn),直至246d載量一直都維持在105copies/mL左右。1-2病毒載量出現(xiàn)最早,初次感染后的23d達(dá)到5.665×105copies/mL,27d達(dá)到高峰(2.1×107copies/mL),隨后下降,至57d檢測(cè)呈陰性,共持續(xù)了4周時(shí)間,并且一直到第246d都持續(xù)陰性。1-3和1-4的載量變化與2號(hào)相似,只是載量出現(xiàn)時(shí)間稍晚,1-3的載量出現(xiàn)在37d,高峰期在45d,也達(dá)到了107copies/mL的水平,但只維持了2周的時(shí)間;1-4比1-2晚4d出現(xiàn)載量,出現(xiàn)時(shí)載量也已達(dá)到105copies/mL的水平,高峰期出現(xiàn)在31d(4.72×106copies/mL),維持了3周左右的載量。不同的是,它們分別在感染后154d和203d出現(xiàn)一過(guò)性小幅反彈,載量水平只在103-104copies/mL之間。1-5和1-6的載量出現(xiàn)最晚,均出現(xiàn)在感染后50d,并且不連續(xù),沒(méi)有明顯的高峰,始終維持在104-106copies/mL的水平。 圖1 SHIVSF162p3小劑量多次陰道途徑感染恒河猴血漿病毒載量結(jié)果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3陰道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值結(jié)果 6只實(shí)驗(yàn)猴的CD4+/CD8+比值在某一段時(shí)間內(nèi)均有一個(gè)急劇下降的過(guò)程,總體有一個(gè)下降的趨勢(shì)。1-1在感染后37d CD4+/CD8+比值迅速?gòu)母腥竞?1d的1.51下降到0.50,并且持續(xù)走低,到300d時(shí),已降低到0.35。1-2和1-4總體沒(méi)有太大的變化,但分別在感染后31d和37d有一個(gè)下降過(guò)程。1-2由27d的3.89直降到1.55,其后又迅速回升,始終徘徊在3.0附近;1-4由2.72直降到1.69,并維持在這個(gè)水平上,只在182d有一個(gè)小幅波動(dòng)。1-3和1-5變化基本相同,分別在感染后45d和64d降到最低,并且出現(xiàn)倒置,其中1-5甚至降到0.5以下,其后反彈并一直維持在0.8-1.0之間。1-6與1-3、1-5趨勢(shì)相同,變化幅度小,沒(méi)有出現(xiàn)倒置,始終維持在1.0以上,最低值1.02出現(xiàn)在85d(圖2)。 圖2 SHIVSF162p3小劑量多次陰道途徑感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3陰道感染恒河猴外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)結(jié)果 所有實(shí)驗(yàn)猴的CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)在感染50天內(nèi)都基本保持穩(wěn)定,在1000個(gè)/µL全血上下浮動(dòng),隨后均有逐步下降,但下降幅度不大,最低值始終在600以上(具體數(shù)據(jù)未顯示)。只有1-1下降幅度較大,到感染后274d時(shí),已降到293個(gè)細(xì)胞/µL猴血(圖3)。 圖3 SHIVSF162p3陰道途徑感染恒河猴1-1 外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的變化 Fig.3 The CD4+ T cell counts in Chinese-original rhesus macaques 1-1 infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 |
證書(shū)編號(hào):241520345370
證書(shū)編號(hào):CNAS L22006
證書(shū)編號(hào):ISO9001-2024001
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