H460細胞系于1982年由A.F. Gazdar自一個男性大細胞肺癌患者的胸腔積液中培養(yǎng)獲得。與普通肺癌細胞相比，該細胞具有較高水平的p53 mRNA的表達并且無總DNA結構異常。免疫酶標染色顯示，該細胞具有角蛋白和波形蛋白陽性反應，但神經(jīng)絲三聯(lián)體蛋白反應陰性。該細胞是人亞三倍體細胞系，典型的染色體數(shù)是57,或者58條染色體數(shù)細胞也存在一定的比例，X和Y染色體在所有細胞中都存在2個拷貝數(shù)。

　　無胸腺裸鼠（Nude Mouse，簡稱裸鼠）目前已成為醫(yī)學生物學研究領域中不可缺少的實驗動物模型。經(jīng)過世界各國實驗動物遺傳育種學家的努力，目前已將nu基因導入不同近交系動物，成為系列動物模型，僅小鼠模型一種，已建立了二十余種近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情況下，不排斥來自異種動物的組織移植。因此可作移植人類惡性腫瘤的接受體。根據(jù)T.Fogh等1979～1980年的報導，已有150株人的瘤細胞和人體原發(fā)癌移植于裸鼠獲得成功，目前已成功地結腸癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、腎癌、宮頸癌、軟組織肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、獲得了一定百分比（35.7%）的良好生長，并可傳代。若用已建株的人體腫瘤組織培養(yǎng)細胞作移植材料，接種后的成活率更高（41%）。

　　本實驗中所用鼠種BALB/C-nu/nu，系1973年從丹麥引入日本中央實驗動物所研究。繼續(xù)培育三年后，交由日本CLEA株式會社進行生產(chǎn)。1980年由CLEA引入。雄鼠是無胸腺裸鼠（BALB/C-nu/nu），雌鼠是有胸腺的雜合小鼠（BALB/C-nu/+）。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機交配法進行繁殖，已取得較好成果，裸鼠的生產(chǎn)性能良好：受胎率達81.5%，平均產(chǎn)仔率8.1只/窩，平均產(chǎn)裸仔率3.99只/窩，窩平均仔鼠成活3.62只，9周齡仔鼠成活率100%，其主要項目數(shù)據(jù)與日本中央實驗動物研究所（CLEA）和英國實驗動物中心（LAC）發(fā)表的材料基本一致

　　模型制作采用BALB／CA-nu裸小鼠，鼠齡5周，體重15—18 g，在無特定病原體(specific—pathogen free，SPF)的飼養(yǎng)間飼養(yǎng)。

4.1細胞培養(yǎng)：H460細胞為本實驗室凍存

4.2構建帶有篩選標記的載體：chicken-β-actin- promoter-eGFP

圖1綠色熒光表達載體的構建

4.3細胞轉染和篩選：采用Lipofectamine 2000 Reagent轉染H460細胞。轉染后，用含G418的培養(yǎng)液篩選細胞，獲得穩(wěn)定表達GFP的細胞株，選擇其中高表達的克隆株擴大培養(yǎng)（圖2）。

圖2綠色熒光標記的H460-eGFP細胞系（200×）

　　穩(wěn)定高表達GFP的細胞，在熒光顯微鏡下均呈強熒光，并且熒光較均勻的分布于整個細胞內(nèi)。單克隆GFP細胞在無G418篩選壓力下，傳代數(shù)次后仍能穩(wěn)定高水平表達GFP(圖2)。細胞形態(tài)和未轉染細胞無明顯區(qū)別。

4.4腫瘤細胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長對數(shù)期的高表達細胞株，進行裸鼠皮下接種，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動態(tài)觀察。