食管癌EC9706細(xì)胞系來源于中國(guó)人蕈傘型高分化食管鱗癌，貼壁生長(zhǎng)。

　　無胸腺裸鼠（Nude Mouse，簡(jiǎn)稱裸鼠）目前已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中不可缺少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。經(jīng)過世界各國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳育種學(xué)家的努力，目前已將nu基因?qū)氩煌幌祫?dòng)物，成為系列動(dòng)物模型，僅小鼠模型一種，已建立了二十余種近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷，在一定情況下，不排斥來自異種動(dòng)物的組織移植。因此可作移植人類惡性腫瘤的接受體。根據(jù)T.Fogh等1979～1980年的報(bào)導(dǎo)，已有150株人的瘤細(xì)胞和人體原發(fā)癌移植于裸鼠獲得成功，目前已成功地結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、腎癌、宮頸癌、軟組織肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、獲得了一定百分比（35.7%）的良好生長(zhǎng)，并可傳代。若用已建株的人體腫瘤組織培養(yǎng)細(xì)胞作移植材料，接種后的成活率更高（41%）。

　　本實(shí)驗(yàn)中所用鼠種BALB/C-nu/nu，系1973年從丹麥引入日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所研究。繼續(xù)培育三年后，交由日本CLEA株式會(huì)社進(jìn)行生產(chǎn)。1980年由CLEA引入。雄鼠是無胸腺裸鼠（BALB/C-nu/nu），雌鼠是有胸腺的雜合小鼠（BALB/C-nu/+）。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機(jī)交配法進(jìn)行繁殖，已取得較好成果，裸鼠的生產(chǎn)性能良好：受胎率達(dá)81.5%，平均產(chǎn)仔率8.1只/窩，平均產(chǎn)裸仔率3.99只/窩，窩平均仔鼠成活3.62只，9周齡仔鼠成活率100%，其主要項(xiàng)目數(shù)據(jù)與日本中央實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所（CLEA）和英國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（LAC）發(fā)表的材料基本一致。

　　模型制作采用BALB／CA-nu裸小鼠，鼠齡5周，體重15—18 g，在無特定病原體(specific—pathogen free，SPF)的飼養(yǎng)間飼養(yǎng)。

4.1細(xì)胞培養(yǎng)：EC9706細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室凍存

4.2構(gòu)建帶有篩選標(biāo)記的載體：chicken-β-actin- promoter-eGFP

圖1綠色熒光表達(dá)載體的構(gòu)建

4.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選：采用Lipofectamine 2000 Reagent轉(zhuǎn)染EC9706細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后，用含G418的培養(yǎng)液篩選細(xì)胞，獲得穩(wěn)定表達(dá)GFP的細(xì)胞株，選擇其中高表達(dá)的克隆株擴(kuò)大培養(yǎng)（圖2）。

圖2綠色熒光標(biāo)記的EC9706細(xì)胞系（200×）

　　穩(wěn)定高表達(dá)GFP的細(xì)胞，在熒光顯微鏡下均呈強(qiáng)熒光，并且熒光較均勻的分布于整個(gè)細(xì)胞內(nèi)。單克隆GFP細(xì)胞在無G418篩選壓力下，傳代數(shù)次后仍能穩(wěn)定高水平表達(dá)GFP(圖2)。細(xì)胞形態(tài)和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞無明顯區(qū)別。

4.4腫瘤細(xì)胞的植入及活體熒光成像：收集處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的高表達(dá)細(xì)胞株，進(jìn)行裸鼠皮下接種，采用活體熒光影像系統(tǒng)攝像動(dòng)態(tài)觀察。