1、實(shí)驗(yàn)儀器
束縛采用的實(shí)驗(yàn)儀器為大、小鼠行為限制器。由聚酯材料構(gòu)成，透明可視，方便監(jiān)視大小鼠的行為狀態(tài)。頂端和底部有多個(gè)直徑1cm通氣孔，有助于大小鼠的呼吸暢通、排泄物的排出，避免對(duì)建模帶來干擾。行為限制器的長(zhǎng)度可調(diào)，可將不同體重動(dòng)物的束縛強(qiáng)度同一化。
圖1 行為限制器實(shí)物圖
2.實(shí)驗(yàn)方法
將行為限制器平放、底部敞開，使動(dòng)物面朝行為限制器敞口進(jìn)入內(nèi)部。用配套的塞托封閉開口并固定塞托。使固定后，動(dòng)物在行為限制器內(nèi)的空間長(zhǎng)度小于其身長(zhǎng)，并保證只有頭部可以自由活動(dòng)而四肢活動(dòng)受限（圖2）。
圖2 行為限制器的大鼠束縛
慢性束縛模型是采用行為制動(dòng)的方式對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生單純性心理應(yīng)激，是比較常用的用于制備情緒、學(xué)習(xí)記憶障礙等動(dòng)物模型的方法。引起抑郁、焦慮和學(xué)習(xí)記憶障礙的束縛強(qiáng)度不同文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)有一定的差異。大多報(bào)導(dǎo)強(qiáng)度在4 h-8 h/day、連續(xù)14-48 d 。
慢性束縛致學(xué)習(xí)記憶模型的建立
一般慢性束縛致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型的建立采用每日限制大鼠活動(dòng) 10 h( 18: 00 至次日 8: 00) ，限制活動(dòng)期間各組禁食禁水。連續(xù)限制活動(dòng) 28 d，第 29 天開始進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。
一般慢性束縛致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型的建立采用每日限制大鼠活動(dòng) 6h（10：00-16：00），限制活動(dòng)期間各組禁食禁水。連續(xù)限制活動(dòng) 21 d，第 22 天開始進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。
3、行為學(xué)檢測(cè)
慢性束縛到規(guī)定時(shí)間后，依實(shí)驗(yàn)需要，采用學(xué)習(xí)記憶行為實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)。
4. 注意事項(xiàng)
（1）行為實(shí)驗(yàn)檢測(cè)應(yīng)在動(dòng)物自由飲食飲水期間進(jìn)行。
（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠體重應(yīng)該控制在 280-300 g。小鼠體重應(yīng)該控制在25-32 g
（3）由于束縛器是樹脂材料的圓柱形，頂端有數(shù)個(gè)通氣的小孔，才束縛早期由于動(dòng)物掙扎劇烈，會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物窒息的情況，所以一開始需要我們 24 h 觀察，及時(shí)排除動(dòng)物窒息死亡的情形。
（4）行為測(cè)試完畢后的動(dòng)物要返回行為限制器內(nèi)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
5. 模型分析指標(biāo)
5.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)
圓形迷宮直徑為159 cm、高50 cm，池中水深25. 5 cm 左右，內(nèi)置平臺(tái)直徑9 cm、高24 cm，水溫維持在( 24 ± 1) ℃。將迷宮置于空間信息相對(duì)豐富的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，作為動(dòng)物學(xué)習(xí)過程中的空間參照物，整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)保持環(huán)境信息固定不變。將迷宮均分為4 個(gè)象限，將平臺(tái)置于其中一個(gè)象限中央，作為實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物逃離水環(huán)境的唯一途徑，空間記憶階段保持平臺(tái)位置固定不變。選擇其余3 個(gè)象限作為動(dòng)物的入水點(diǎn)將動(dòng)物面向池壁放入水中，每天訓(xùn)練3 次，每次變換入水點(diǎn)位置( 使動(dòng)物可分別從3 個(gè)象限入水) ，且每天所有動(dòng)物入水點(diǎn)的順序保持一致。每次訓(xùn)練前適應(yīng)10 s，使動(dòng)物獲取并學(xué)習(xí)空間環(huán)境信息。設(shè)置檢測(cè)時(shí)間為60s 后，將動(dòng)物放入水中，若動(dòng)物在60 s 內(nèi)找到平臺(tái)，算作尋臺(tái)成功并記錄其潛伏期，并使其在平臺(tái)上停留休息10 s。若動(dòng)物在60 s內(nèi)未找到平臺(tái)，結(jié)束此次訓(xùn)練并記錄潛伏期為60 s，并引導(dǎo)動(dòng)物靠近平臺(tái)使其在平臺(tái)上停留10 s。每只動(dòng)物訓(xùn)練的時(shí)間間隔為40 min。每天每只動(dòng)物3 次訓(xùn)練學(xué)習(xí)的潛伏期平均值，作為評(píng)價(jià)動(dòng)物這一天學(xué)習(xí)能力的指標(biāo)。經(jīng)過5d 的訓(xùn)練學(xué)習(xí)后，第6 天撤去平臺(tái)，進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物從原平臺(tái)象限的對(duì)角象限面向池壁放入水中，檢測(cè)其在60s 內(nèi)在原平臺(tái)象限的游程比、時(shí)間比，以及穿過原平臺(tái)所在位置的次數(shù)，作為評(píng)價(jià)空間記憶能力的指標(biāo)。
5.2 水迷宮工作記憶
空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，開始工作記憶實(shí)驗(yàn)。工作記憶歷時(shí)3d，分別將平臺(tái)置于其余3 個(gè)不同象限中，每天變換平臺(tái)位置，同一天內(nèi)平臺(tái)位置保持不變。每天訓(xùn)練3 次，依次從其余3 個(gè)非平臺(tái)象限將動(dòng)物面朝池壁放入水中。訓(xùn)練前不予適應(yīng)，其余同空間訓(xùn)練階段一致。計(jì)算3 天中，第2 次訓(xùn)練潛伏期的平均值，作為評(píng)價(jià)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。
5.3新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)箱為黑色聚酯塑料材質(zhì)構(gòu)成的封閉箱，體積為60 cm × 40 cm × 80 cm，箱體左右兩側(cè)各有兩排LED 燈條照明，既避免了強(qiáng)光直射對(duì)動(dòng)物行為的干擾，又可以作為計(jì)算機(jī)對(duì)動(dòng)物行為識(shí)別的背景光。頂部采用攝像頭觀察動(dòng)物的活動(dòng)情況及探索過程。實(shí)驗(yàn)過程分為3 個(gè)階段: 適應(yīng)期、熟悉期、測(cè)試期。適應(yīng)期為3d，每天將動(dòng)物依次放入實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)，熟悉環(huán)境10 min。適應(yīng)期結(jié)束后，次日進(jìn)行熟悉和測(cè)試。熟悉期時(shí)，將兩個(gè)完全相同的物體放入實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)對(duì)稱的位置處，此兩物體距離側(cè)箱壁、箱后壁的距離均為10 cm。記錄大鼠5 min 內(nèi)對(duì)兩物體的探索總時(shí)間。間隔30 min 后，進(jìn)入測(cè)試期。測(cè)試期內(nèi)，將其中一個(gè)熟悉物體換為另一個(gè)大小相近但形狀和顏色不同的新穎物體，記錄大鼠對(duì)新穎物體和熟悉物體的探索時(shí)間，用辨別指數(shù)( discriminationindex，DI) 來評(píng)價(jià)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力。辨別指數(shù)計(jì)算公式為DI = ( N-F) /( N + F) × 100%，其中N( new) 為新穎物體探索時(shí)間，F(xiàn)( familiar) 為熟悉物體探索時(shí)間。
|
掃一掃，更多精彩
