1. 藥品與試劑
水合氯醛（或其它麻醉藥物如戊巴比妥鈉）；無(wú)菌生理鹽水（或PBS或雙蒸水）；H2O2溶液；吸收性明膠海綿；青霉素鈉粉；云南白藥；乙醇。
2. 實(shí)驗(yàn)儀器 腦立體定位儀；電動(dòng)磨鉆；自制探針；真空水泵；手術(shù)器械。
3. 實(shí)驗(yàn)方法
在手術(shù)前1周內(nèi)，每日對(duì)大鼠進(jìn)行2次撫摸以減少應(yīng)激。術(shù)前給予水合氯醛（400 mg/kg，ip）麻醉大鼠，在兩耳聯(lián)線中點(diǎn)處將皮膚切開(kāi)，暴露顱骨，在距前囟前8 mm，與正中縫兩側(cè)旁開(kāi)2 mm的交點(diǎn)處，分別用電動(dòng)磨鉆將顱骨鉆兩個(gè)直徑2 mm 的小孔，用自制探針攪動(dòng)破壞嗅球后，再用真空泵將破壞的嗅球組織吸出。將吸收性明膠海綿填入小孔止血。假手術(shù)大鼠采用相同的手術(shù)方法，但在手術(shù)定位點(diǎn)上鉆孔后不損傷嗅球。術(shù)后采用75 %乙醇-云南白藥混合劑涂抹傷口，并肌注青霉素鈉（40000 U/ml），連續(xù)注射4 d，以防術(shù)后感染。嗅球切除術(shù)后大鼠需恢復(fù)14 d，恢復(fù)階段每日撫摸大鼠以減少應(yīng)激性，14天后方可進(jìn)行藥物處理及行為學(xué)測(cè)試。行為學(xué)測(cè)試主要包括開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、蔗糖飲水實(shí)驗(yàn)、被動(dòng)回避實(shí)驗(yàn)等。
圖1 大鼠嗅球解剖位置示意圖
4. 注意事項(xiàng)
（1）大鼠體重會(huì)影響嗅球解剖位置的定位坐標(biāo)；
（2）術(shù)前、術(shù)后的撫觸可有效減少大鼠的應(yīng)激反應(yīng)；
（3）手術(shù)過(guò)程中應(yīng)盡量減少出血；
（4）行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，每只動(dòng)物需檢查嗅球和前額葉皮層位置，對(duì)于嗅球切除體積低于70%或損傷前額葉皮層的動(dòng)物，數(shù)據(jù)應(yīng)剔除。
圖2 大鼠嗅球切除前后對(duì)比（A嗅球切除前；B嗅球切除后）
5. 模型分析指標(biāo)
5.1 開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)
利用大鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)實(shí)時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。自主活動(dòng)測(cè)試箱為黑色不銹鋼材料制成的圓柱形桶，測(cè)試箱頂部敞開(kāi)。采用圖像采集系統(tǒng)對(duì)測(cè)試大鼠的行為進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，再通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對(duì)。大鼠的自主活動(dòng)信息進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。檢測(cè)時(shí)將大鼠面壁放入測(cè)試箱內(nèi)，動(dòng)物放入測(cè)試箱內(nèi)，立即開(kāi)始檢測(cè)。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)從同一位置同一方向放入動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)時(shí)間宜為5 min-10 min。
5.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)
利用計(jì)算機(jī)圖像實(shí)時(shí)檢測(cè)分析處理系統(tǒng)自動(dòng)分析記錄動(dòng)物運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。將小鼠放入小鼠強(qiáng)迫游泳儀器中( 高20 cm，直徑18 cm，水深12 cm)，保持水溫(23~25 °C)。動(dòng)物適應(yīng)2 min后，系統(tǒng)自動(dòng)記錄動(dòng)物后4 min 內(nèi)的累積不動(dòng)時(shí)間( 不動(dòng)狀態(tài)即小鼠四肢有輕微動(dòng)作以保持頭部在水面，小鼠呈現(xiàn)出停止掙扎或呈漂浮狀態(tài))。
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