C57BL/6小鼠

1、模型設(shè)計(jì)原理：

GRNA介導(dǎo)Cas9蛋白剪切目標(biāo)外顯子兩端的內(nèi)含子DNA，同時(shí)提供同源模板Donor，基因組兩端通過同源重組修復(fù)方式進(jìn)行DNA修復(fù)，在特定外顯子兩端插入FloxP。 NHE1-FloxP小鼠與組織特異性表達(dá)Cre小鼠交配，從而實(shí)現(xiàn)NHE1基因條件性敲除的目的。實(shí)驗(yàn)采用最新的spCas91.1進(jìn)行注射，減少了基因組中的off-Target。

2、動(dòng)物模型制備

2.1 NHE1^floxp/flox小鼠鑒定PCR結(jié)果分析

2.2 NHE1^flox/flox, Plt Cre小鼠測序結(jié)果分析

經(jīng)鑒定1#和4#為NHE1^flox/flox, Plt Cre 條件性敲除小鼠。

3. 標(biāo)本采集及處理  

條件性敲除小鼠2月齡后，稱體重，麻醉后腹主動(dòng)脈采血至死亡，室溫靜置2h后于4℃ 3000r離心10分鐘提取血清，-80℃冰箱凍存。取心臟、主動(dòng)脈做石蠟切片，10%中性福爾馬林中固定，30%蔗糖脫水，冰凍切片包埋劑包埋并切片；進(jìn)行免疫組化及免疫熒光檢測，其余血管組織液氮冷凍-80℃保存，提取蛋白進(jìn)行免疫印跡檢測。