試驗(yàn)背景
核酸檢測(cè)技術(shù)已成為血液篩查實(shí)驗(yàn)室的重要實(shí)驗(yàn)手段，但因其靈敏度高的特點(diǎn)，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也容易受到污染，特別是核酸的氣溶膠污染比較嚴(yán)重。
在新冠病毒核酸檢測(cè)過(guò)程中，常見以下幾種污染類型：擴(kuò)增片段的污染(產(chǎn)物污染);天然基因組 DNA的污染、試劑污染(貯存液或工作液)以及樣本間交叉污染。
核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室污染的主要來(lái)源是擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。 目前國(guó)內(nèi)所有二級(jí)以上綜合醫(yī)院都具備了核酸檢測(cè)能力，大部分醫(yī)院也設(shè)立了PCR 實(shí)驗(yàn)室，高強(qiáng)度的核酸檢測(cè)任務(wù)已成為了檢驗(yàn)員的工作常態(tài)，如果一旦出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室核酸污染，可能會(huì)造成假陽(yáng)性的結(jié)果，導(dǎo)致結(jié)果不可信，甚至可能會(huì)危及實(shí)驗(yàn)室工作人員安全。 核酸實(shí)驗(yàn)室污染后難以清除，有可能造成實(shí)驗(yàn)室不能使用的風(fēng)險(xiǎn)。
如果一旦出現(xiàn)核酸實(shí)驗(yàn)室污染，除了常規(guī)的清潔消毒方法之外，還可以進(jìn)行通過(guò)空間滅菌方法進(jìn)行核酸清除試驗(yàn)。
試驗(yàn)對(duì)象
可以針對(duì)核酸去除劑、核酸清除劑、核酸降解劑、核酸降解儀等核酸清除產(chǎn)品檢測(cè)，開展核酸氣溶膠污染的空氣清除試驗(yàn)檢測(cè)。
試驗(yàn)方法
1.核酸清除試驗(yàn)檢測(cè)設(shè)備
3m3試驗(yàn)艙、二級(jí)生物安全柜、熒光定量PCR儀、渦旋混勻器、低溫冰箱、低溫高速離心機(jī)、PCR專用微量移液器、水浴鍋。
2. 核酸清除試驗(yàn)試劑耗材
病毒DNA/RNA提取試劑盒、ASFV基因質(zhì)粒熒光定量qPCR試劑盒、TE緩沖液、96~100%乙醇、超純水、去RNA酶水、PBS溶液等。
3. 核酸清除試驗(yàn)步驟
1)樣品配制：根據(jù)客戶要求倍比稀釋，待用;
2)將稀釋好的核酸降解劑加入到消毒噴霧設(shè)備中，將設(shè)備放入3m3試驗(yàn)艙中，連接電源并設(shè)置好噴霧程序，待用;
3)試驗(yàn)樣品的制備：在對(duì)照組和樣品組植絨棉簽上各加50μL陽(yáng)性對(duì)照，固定在EP管架上待其自然風(fēng)干;
4)將其中對(duì)照組植絨棉簽放置在室溫下(不熏蒸)，樣品組植絨棉簽固定在EP管架上放入試驗(yàn)艙中，關(guān)緊艙門;
5)通過(guò)橡膠手套按下消毒噴霧設(shè)備的啟動(dòng)鍵，噴霧10min，待噴霧結(jié)束后開始計(jì)時(shí);
6)靜置密閉2h后，通過(guò)傳遞艙將試驗(yàn)組的植絨棉簽取出，開啟凈化30 min;
7)將每支植絨棉簽在1mL離心管中各自用1mLTE緩沖液進(jìn)行洗脫，取200μuL進(jìn)行核酸提取;
8)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后進(jìn)行qPCR試驗(yàn)。
4. 結(jié)果計(jì)算
CMA認(rèn)證
檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號(hào)：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
證書編號(hào)：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號(hào)：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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