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動(dòng)物血清豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-09-15 18:25:06 更新時(shí)間：2025-09-15 23:53:29

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

檢測(cè)項(xiàng)目

動(dòng)物血清豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)是一項(xiàng)重要的獸醫(yī)診斷項(xiàng)目，主要針對(duì)豬群中豬流行性腹瀉病毒（PEDV）的抗體水平進(jìn)行定量或定性分析。豬流行性腹瀉是一種高度接觸性腸道傳染病，由豬流行性腹瀉病毒引起，可導(dǎo)致豬只出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、脫水等癥狀，尤其對(duì)新生仔豬具有高死亡率，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。該檢測(cè)項(xiàng)目常用于評(píng)估豬群的免疫狀態(tài)、監(jiān)測(cè)疫苗免疫效果、診斷疫情暴發(fā)以及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。通過(guò)檢測(cè)血清中的特異性抗體，可以判斷豬只是否感染過(guò)PEDV或是否通過(guò)疫苗接種產(chǎn)生了保護(hù)性免疫，從而為豬場(chǎng)制定科學(xué)的防控策略提供依據(jù)。此外，該檢測(cè)還可用于進(jìn)出口檢疫、種豬健康認(rèn)證以及無(wú)特定病原（SPF）豬群的建立與維護(hù)，確保豬只健康和生產(chǎn)安全。

檢測(cè)儀器

在進(jìn)行動(dòng)物血清豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)時(shí)，常用的檢測(cè)儀器包括酶標(biāo)儀（ELISA reader）、微量移液器（micropipettes）、離心機(jī)（centrifuge）、恒溫培養(yǎng)箱（incubator）、洗板機(jī)（plate washer）以及生物安全柜（biosafety cabinet）。酶標(biāo)儀是核心設(shè)備，用于讀取ELISA試驗(yàn)中的光密度值，從而定量分析抗體水平。微量移液器用于精確加樣和稀釋血清樣本，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。離心機(jī)用于分離血清樣本，去除雜質(zhì)。恒溫培養(yǎng)箱提供穩(wěn)定的溫度環(huán)境，促進(jìn)抗原-抗體反應(yīng)。洗板機(jī)用于自動(dòng)化清洗ELISA板，減少人為誤差。生物安全柜則保障操作人員的安全，防止病原體污染。這些儀器的正確使用和維護(hù)是確保檢測(cè)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵。

檢測(cè)方法

動(dòng)物血清豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法，這是一種高靈敏度、高特異性的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)。檢測(cè)過(guò)程通常包括以下步驟：首先，采集豬只血液樣本，通過(guò)離心分離獲得血清；其次，將血清樣本稀釋后加入已包被PEDV抗原的ELISA板孔中，孵育使抗體與抗原結(jié)合；然后，清洗去除未結(jié)合物質(zhì)，加入酶標(biāo)記的二抗（如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG抗體），再次孵育；接著，清洗后加入底物溶液，酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)；最后，使用酶標(biāo)儀測(cè)量光密度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算抗體滴度或進(jìn)行定性判斷（陽(yáng)性/陰性）。此外，有時(shí)也采用中和試驗(yàn)（VNT）或免疫熒光 assay（IFA）作為補(bǔ)充方法，但ELISA因其高通量、易自動(dòng)化而成為主流。檢測(cè)方法需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作，以避免交叉污染和假陽(yáng)性/假陰性結(jié)果。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

動(dòng)物血清豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)國(guó)際和國(guó)內(nèi)的相關(guān)指南與規(guī)范。國(guó)際上，參考世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）的《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》中關(guān)于PEDV的檢測(cè)建議，確保方法的全球一致性。在國(guó)內(nèi)，遵循中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB）和農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY），例如《豬流行性腹瀉診斷技術(shù)》（GB/T 18635-2020）或相關(guān)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范。這些標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了檢測(cè)樣本的采集、保存和處理要求，試劑的質(zhì)量控制（如抗原純度和特異性驗(yàn)證），實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化流程（如孵育時(shí)間、溫度控制），以及結(jié)果判讀的閾值（例如，ELISA的S/P比值或滴度 cutoff 值）。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需通過(guò)資質(zhì)認(rèn)證（如CNAS認(rèn)可），定期進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制和外部 proficiency testing，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性和可比性。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的設(shè)立是標(biāo)準(zhǔn)操作的重要組成部分，用于監(jiān)控每次試驗(yàn)的有效性。