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馬鈴薯病毒（PLRV）檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-09-15 11:55:54

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

馬鈴薯病毒（PLRV）檢測(cè)的重要性

馬鈴薯卷葉病毒（Potato Leafroll Virus, PLRV）是危害馬鈴薯生產(chǎn)的主要病毒之一，可導(dǎo)致葉片卷曲、黃化、植株矮化及塊莖產(chǎn)量大幅下降，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)可達(dá)80%以上。該病毒通過(guò)蚜蟲(chóng)以持久性方式傳播，也可通過(guò)帶毒種薯進(jìn)行垂直傳播，具有潛伏期長(zhǎng)、隱蔽性強(qiáng)的特點(diǎn)。因此，PLRV的早期檢測(cè)與精準(zhǔn)診斷對(duì)防控病毒擴(kuò)散、保障馬鈴薯產(chǎn)業(yè)安全至關(guān)重要。通過(guò)建立科學(xué)的檢測(cè)體系，能夠快速識(shí)別感染植株，阻斷傳播鏈，并為種薯質(zhì)量認(rèn)證提供技術(shù)支撐。

PLRV檢測(cè)的主要項(xiàng)目

PLRV檢測(cè)通常涵蓋以下核心項(xiàng)目：
1. 病毒癥狀觀察：通過(guò)田間目視檢查葉片卷曲、黃化等典型癥狀，但易與其他病毒或生理性病害混淆；
2. 血清學(xué)檢測(cè)（ELISA）：利用特異性抗體檢測(cè)病毒衣殼蛋白，適用于大批量樣本的初步篩查；
3. 分子生物學(xué)檢測(cè)（RT-PCR/實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）：針對(duì)病毒RNA設(shè)計(jì)引物，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增目標(biāo)序列，靈敏度高，可檢測(cè)潛伏期感染；
4. 核酸雜交技術(shù)：使用標(biāo)記探針與病毒RNA結(jié)合，用于復(fù)雜樣本的精準(zhǔn)定位；
5. 高通量測(cè)序技術(shù)：結(jié)合生物信息學(xué)分析，實(shí)現(xiàn)病毒全基因組測(cè)序及變異株鑒定。

常用檢測(cè)儀器

PLRV檢測(cè)依賴以下關(guān)鍵設(shè)備：
- 酶標(biāo)儀：用于ELISA檢測(cè)的吸光度讀數(shù)；
- PCR儀：完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)；
- 電泳系統(tǒng)：分析PCR產(chǎn)物的凝膠成像；
- 核酸提取儀：自動(dòng)化提取病毒RNA；
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：實(shí)現(xiàn)病毒載量的定量分析；
- 測(cè)序儀：用于病毒基因組解析；
- 光學(xué)顯微鏡：觀察篩管細(xì)胞內(nèi)的病毒內(nèi)含體。

檢測(cè)方法及流程

不同檢測(cè)方法操作流程如下：
ELISA檢測(cè)：樣本研磨→離心取上清→包被抗體→加入待測(cè)樣本→酶標(biāo)二抗顯色→酶標(biāo)儀讀取OD值；
RT-PCR檢測(cè)：RNA提取→逆轉(zhuǎn)錄為cDNA→特異性引物擴(kuò)增→電泳驗(yàn)證目標(biāo)條帶；
實(shí)時(shí)熒光RT-PCR：設(shè)計(jì)TaqMan探針，通過(guò)Ct值判定病毒濃度，全程閉管操作污染風(fēng)險(xiǎn)低；
核酸雜交：將樣本RNA轉(zhuǎn)移到膜上，與標(biāo)記探針雜交后顯影，適用于組織定位分析。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

PLRV檢測(cè)需遵循以下國(guó)際及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：
- 國(guó)際馬鈴薯中心（CIP）標(biāo)準(zhǔn)：規(guī)定種薯認(rèn)證中的PLRV允許閾值；
- ISO 16140：驗(yàn)證分子檢測(cè)方法的特異性和靈敏度；
- GB/T 29377-2012（中國(guó)）：馬鈴薯病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程；
- EPPO標(biāo)準(zhǔn)PP 2/28：規(guī)范田間采樣與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程；
- FAO植物檢疫手冊(cè)：提供ELISA和分子檢測(cè)的操作指南。

質(zhì)量控制要點(diǎn)

為確保檢測(cè)準(zhǔn)確性，需嚴(yán)格實(shí)施：
- 設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（PLRV標(biāo)準(zhǔn)株）和陰性對(duì)照（健康植株）；
- RNA提取時(shí)加入內(nèi)參基因（如馬鈴薯泛素基因）監(jiān)控提取效率；
- 分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理，防止交叉污染；
- 定期校準(zhǔn)儀器并參與國(guó)際能力驗(yàn)證項(xiàng)目；
- 檢測(cè)結(jié)果需結(jié)合癥狀學(xué)與實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)綜合判定。