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sps內(nèi)源基因檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-07-24 22:18:57

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

SPS內(nèi)源基因檢測(cè)概述

SPS（物種特異性內(nèi)源基因）檢測(cè)是生物基因檢測(cè)領(lǐng)域的重要研究方向，主要用于驗(yàn)證樣本的物種來源、檢測(cè)樣本質(zhì)量以及評(píng)估實(shí)驗(yàn)過程中是否存在污染或抑制物干擾。內(nèi)源基因是指生物體內(nèi)固有的、具有物種特異性的基因片段，例如植物中的葉綠體基因或動(dòng)物中的線粒體基因。在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、食品安全評(píng)估及法醫(yī)鑒定等領(lǐng)域，SPS內(nèi)源基因檢測(cè)通過靶向這些特有序列，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。例如，在轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)中，內(nèi)源基因可作為陽(yáng)性對(duì)照，判斷樣本是否適合進(jìn)行后續(xù)目標(biāo)基因分析。

檢測(cè)項(xiàng)目

SPS內(nèi)源基因檢測(cè)的核心項(xiàng)目包括：
1. 物種特異性內(nèi)源基因篩選：針對(duì)不同物種（如玉米、大豆、水稻等）設(shè)計(jì)特異性引物，驗(yàn)證其唯一性；
2. 基因表達(dá)穩(wěn)定性分析：評(píng)估內(nèi)源基因在不同組織或環(huán)境中的表達(dá)水平；
3. 抑制物干擾檢測(cè)：通過內(nèi)源基因擴(kuò)增效率判斷樣本中是否存在PCR抑制物；
4. 定量檢測(cè)：結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行相對(duì)定量分析。

檢測(cè)儀器

完成SPS檢測(cè)需依賴以下關(guān)鍵儀器：
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX）：用于高靈敏度擴(kuò)增和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)基因表達(dá)；
- 核酸提取儀（如MagCore HF16）：實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化樣本DNA/RNA純化；
- 電泳系統(tǒng)：驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物大小及特異性；
- 測(cè)序儀（如Illumina MiSeq）：用于內(nèi)源基因序列確認(rèn)及數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)。

檢測(cè)方法

檢測(cè)流程分為四個(gè)關(guān)鍵步驟：
1. 核酸提取與質(zhì)控：采用CTAB法或試劑盒提取DNA，通過分光光度計(jì)檢測(cè)純度（OD260/280≥1.8）；
2. 引物設(shè)計(jì)與驗(yàn)證：基于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)物種特異性引物，并通過BLAST比對(duì)排除非特異性結(jié)合；
3. PCR擴(kuò)增：設(shè)置梯度退火溫度優(yōu)化反應(yīng)條件，同時(shí)加入陰性/陽(yáng)性對(duì)照；
4. 結(jié)果分析：通過熔解曲線分析擴(kuò)增特異性，Ct值≤35視為有效檢測(cè)。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

SPS檢測(cè)需符合以下國(guó)際與國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
- ISO 21569:2005《分子生物學(xué)檢測(cè)方法驗(yàn)證規(guī)范》；
- GB/T 19495.4-2018《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸定量檢測(cè)方法》；
- SN/T 1194-2020《植物及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè) 抽樣和制樣方法》；
- AOAC Official Method 2004.04：針對(duì)玉米內(nèi)源基因Adh1的檢測(cè)指南。