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雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 05:55:02 更新時(shí)間：2025-05-13 21:44:30

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)

雞病毒性關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)概述

雞病毒性關(guān)節(jié)炎（Viral Arthritis, VA）是由禽呼腸孤病毒（Avian Reovirus, ARV）引起的一種高度接觸性傳染病，主要侵害雞的關(guān)節(jié)滑膜、腱鞘和心肌，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腫脹、跛行及生長(zhǎng)遲緩。該病在全球范圍內(nèi)對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成顯著經(jīng)濟(jì)損失，尤其是肉雞和種雞群。瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）作為一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測(cè)方法，因其操作簡(jiǎn)便、成本低廉且特異性較高等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于病毒性關(guān)節(jié)炎抗體的檢測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查。

檢測(cè)項(xiàng)目

本試驗(yàn)主要針對(duì)雞血清或卵黃中禽呼腸孤病毒特異性抗體的檢測(cè)，用于評(píng)估雞群免疫狀態(tài)、疫苗效果監(jiān)測(cè)或感染早期診斷。檢測(cè)對(duì)象包括感染雞的關(guān)節(jié)液、組織勻漿液或病毒培養(yǎng)物中的抗原成分。通過(guò)AGID試驗(yàn)，可區(qū)分自然感染與疫苗免疫產(chǎn)生的抗體，為疫病防控提供依據(jù)。

檢測(cè)儀器與試劑

試驗(yàn)所需核心儀器包括：1. 瓊脂糖電泳儀（用于制備瓊脂板）；2. 恒溫培養(yǎng)箱（37℃孵育條件控制）；3. 微量移液器（精確加樣）；4. 暗視野觀察燈（增強(qiáng)沉淀線顯影效果）。試劑主要包括：瓊脂糖、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清/抗原、陰性對(duì)照血清、pH 7.2磷酸鹽緩沖液（PBS）以及染色劑（如考馬斯亮藍(lán)）等。

檢測(cè)方法與步驟

1. 瓊脂板制備：將1%瓊脂糖溶于PBS中，加熱溶解后傾注于平皿中形成厚度約3mm的凝膠層，冷卻凝固后打孔（中心孔為抗原，周邊孔為待測(cè)血清）。 2. 樣本處理：采集雞血清或卵黃樣本離心去除雜質(zhì)，56℃滅活30分鐘。 3. 加樣與擴(kuò)散：中心孔加入已知抗原，周邊孔依次加入陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照及待檢樣本，置于濕盒中37℃孵育18-24小時(shí)。 4. 結(jié)果判讀：觀察抗原與抗體間是否形成白色沉淀線，陽(yáng)性樣本在抗原孔與血清孔間呈現(xiàn)清晰直線，陰性則無(wú)此現(xiàn)象。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果解釋

試驗(yàn)需嚴(yán)格遵循《動(dòng)物疫病診斷技術(shù)規(guī)范》（GB/T 18635-2020）及《禽呼腸孤病毒檢測(cè)規(guī)程》（NY/T 563-2016）。判定標(biāo)準(zhǔn)為： - 陽(yáng)性：至少一條明顯沉淀線且與陽(yáng)性對(duì)照一致； - 陰性：無(wú)沉淀線或與陰性對(duì)照一致； - 可疑：沉淀線模糊需重復(fù)試驗(yàn)或結(jié)合PCR進(jìn)一步確認(rèn)。檢測(cè)報(bào)告應(yīng)注明樣本來(lái)源、檢測(cè)條件及結(jié)果判定依據(jù)，必要時(shí)提供抗體效價(jià)分析。

該方法的靈敏度為80%-90%，特異性可達(dá)95%以上，但需注意避免樣本溶血、瓊脂板干燥或孵育溫度異常導(dǎo)致的假陰性。對(duì)于規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，建議結(jié)合分子生物學(xué)方法（如RT-PCR）進(jìn)行綜合診斷。