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魚(yú)類(lèi)病毒性神經(jīng)壞死病(VNN)診斷檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 05:45:20 更新時(shí)間：2025-06-09 21:49:51

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

魚(yú)類(lèi)病毒性神經(jīng)壞死?。╒NN）診斷檢測(cè)概述

魚(yú)類(lèi)病毒性神經(jīng)壞死病（Viral Nervous Necrosis, VNN）是由神經(jīng)壞死病毒（NNV）引起的一種嚴(yán)重危害海水和淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的高度傳染性疾病，主要感染魚(yú)類(lèi)的腦、視網(wǎng)膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致幼魚(yú)和成魚(yú)出現(xiàn)異常游動(dòng)、體色變暗、眼球渾濁甚至大規(guī)模死亡。該病自20世紀(jì)90年代以來(lái)在全球范圍內(nèi)暴發(fā)，對(duì)石斑魚(yú)、鱸魚(yú)、比目魚(yú)等高經(jīng)濟(jì)價(jià)值魚(yú)類(lèi)的養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。因此，建立快速、準(zhǔn)確的診斷方法對(duì)疾病防控和產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

檢測(cè)項(xiàng)目

VNN的檢測(cè)主要包括以下項(xiàng)目：
1. 臨床癥狀觀察：檢查魚(yú)類(lèi)是否出現(xiàn)螺旋式游動(dòng)、平衡失調(diào)、攝食減少等典型癥狀。
2. 病理組織學(xué)檢測(cè)：通過(guò)顯微鏡觀察腦部和視網(wǎng)膜組織的空泡化病變。
3. 病毒分離與培養(yǎng)：利用敏感細(xì)胞系（如SSN-1細(xì)胞）進(jìn)行病毒擴(kuò)增。
4. 分子生物學(xué)檢測(cè)：通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR或LAMP技術(shù)檢測(cè)病毒核酸。
5. 免疫學(xué)檢測(cè)：采用ELISA或免疫熒光法（IFA）檢測(cè)病毒抗原或抗體。

檢測(cè)儀器

VNN診斷中常用的儀器包括：
- PCR儀：用于病毒核酸的擴(kuò)增與檢測(cè)。
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：定量分析病毒載量，具有高靈敏度和特異性。
- 酶標(biāo)儀：用于ELISA實(shí)驗(yàn)中的吸光度測(cè)定。
- 熒光顯微鏡：觀察免疫熒光標(biāo)記的病毒抗原。
- 超速離心機(jī)：病毒分離純化的關(guān)鍵設(shè)備。
- 組織切片機(jī)與電子顯微鏡：用于病理學(xué)觀察和病毒顆粒形態(tài)分析。

檢測(cè)方法

1. RT-PCR法：提取魚(yú)體組織RNA后，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增NNV的特異性基因片段（如RNA依賴(lài)性RNA聚合酶基因），結(jié)合凝膠電泳確認(rèn)結(jié)果。
2. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：利用TaqMan探針技術(shù)實(shí)現(xiàn)病毒核酸的定量檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)10^1拷貝/μL，適用于早期感染診斷。
3. 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）：無(wú)需復(fù)雜儀器，通過(guò)恒溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)病毒核酸，適合現(xiàn)場(chǎng)篩查。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)法：將病魚(yú)組織勻漿液接種至敏感細(xì)胞系，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）和病毒增殖情況。
5. 免疫學(xué)方法：使用單克隆抗體通過(guò)ELISA或免疫熒光技術(shù)檢測(cè)病毒抗原，或檢測(cè)感染魚(yú)血清中的特異性抗體。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

VNN的檢測(cè)需遵循以下國(guó)際和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
- OIE《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》：規(guī)定了NNV的病原鑒定和檢測(cè)流程。
- GB/T 36193-2018（中國(guó)）：魚(yú)類(lèi)神經(jīng)壞死病毒檢測(cè)方法（RT-PCR法）。
- SN/T 1675-2013（中國(guó)）：魚(yú)類(lèi)病毒性神經(jīng)壞死病檢疫技術(shù)規(guī)范。
- ISO/TS 15216-2:2013：水產(chǎn)品中病毒檢測(cè)的分子生物學(xué)方法標(biāo)準(zhǔn)。
- 行業(yè)規(guī)范：如水產(chǎn)養(yǎng)殖企業(yè)的內(nèi)部操作指南，要求定期監(jiān)測(cè)親魚(yú)和苗種的病毒攜帶情況。

通過(guò)綜合應(yīng)用上述檢測(cè)技術(shù)并嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)流程，可有效實(shí)現(xiàn)VNN的早期診斷、疫病監(jiān)控和凈化處理，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供技術(shù)保障。