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馬傳染性貧血病間接ELISA診斷檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-09-15 08:17:07

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

馬傳染性貧血病間接ELISA診斷檢測概述

馬傳染性貧血?。‥quine Infectious Anemia, EIA）是由馬傳染性貧血病毒（EIAV）引起的一種慢性或急性傳染病，主要通過吸血昆蟲傳播，對馬屬動(dòng)物危害極大。該病以發(fā)熱、貧血、消瘦及免疫抑制為特征，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為須通報(bào)的疫病之一。間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（間接ELISA）作為一種高靈敏度、高特異性的血清學(xué)檢測方法，已成為實(shí)驗(yàn)室診斷EIA的核心技術(shù)。其原理是通過病毒抗原包被反應(yīng)板，捕獲血清中的特異性抗體，再結(jié)合酶標(biāo)二抗進(jìn)行信號(hào)放大，最終通過顯色反應(yīng)判定抗體存在與否，為疫病防控提供科學(xué)依據(jù)。

檢測項(xiàng)目與核心指標(biāo)

間接ELISA檢測的核心目標(biāo)是檢測馬血清中針對EIAV的特異性抗體。檢測項(xiàng)目包括：
1. 抗體定性檢測：判斷樣本中是否存在EIAV抗體；
2. 抗體效價(jià)分析（需定量試劑盒）：評估抗體濃度水平；
3. 交叉反應(yīng)排除：通過特異性對照排除其他病毒抗體的干擾。

檢測儀器與設(shè)備

開展間接ELISA檢測需配備以下核心儀器：
- 酶標(biāo)儀：用于讀取450nm波長下的吸光度值（OD值）；
- 洗板機(jī)：確保反應(yīng)板洗脫的標(biāo)準(zhǔn)化操作；
- 恒溫孵育箱：維持37℃恒溫環(huán)境以完成抗原-抗體結(jié)合；
- 微量移液器：精確加樣（范圍1-1000μL）；
- 振蕩器：用于反應(yīng)溶液的混合均勻。

檢測方法與操作流程

間接ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)流程分為以下步驟：
1. 抗原包被：將純化的EIAV抗原包被于96孔板，4℃過夜；
2. 封閉處理：加入5%脫脂牛奶封閉非特異性位點(diǎn)；
3. 血清孵育：加入待檢血清（稀釋比例通常為1:100），37℃孵育1小時(shí)；
4. 二抗結(jié)合：加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗馬IgG二抗；
5. 顯色反應(yīng)：TMB底物顯色，2M硫酸終止反應(yīng)；
6. 結(jié)果判讀：通過酶標(biāo)儀測定OD值，計(jì)算臨界值（Cut-off值），判定陽性/陰性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

檢測過程需嚴(yán)格遵守以下國際及國家標(biāo)準(zhǔn)：
- OIE標(biāo)準(zhǔn)：《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊》中的EIA診斷指南；
- 國家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T XXXX《馬傳染性貧血診斷技術(shù)》；
- 質(zhì)量控制要求：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陽性對照、陰性對照及空白對照，OD值需滿足陽性對照/陰性對照（P/N）≥2.1，且陰性對照OD值≤0.3。

注意事項(xiàng)與局限性

間接ELISA檢測需注意：
1. 避免反復(fù)凍融血清樣本，防止抗體效價(jià)下降；
2. 嚴(yán)格校準(zhǔn)酶標(biāo)儀，確保吸光度值準(zhǔn)確性；
3. 對弱陽性樣本需結(jié)合瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）復(fù)核；
4. 疫苗接種后可能出現(xiàn)短暫抗體陽性，需結(jié)合臨床病史綜合判斷。