茨城病和鹿流行性出血病概述
茨城病（Ibaraki Disease）和鹿流行性出血?。‥pizootic Hemorrhagic Disease, EHD）是兩種由不同病毒引起的重要動物疫病，主要影響反芻動物，尤其是牛和鹿。茨城病由茨城病毒（Ibaraki Virus）引發(fā)，屬于呼腸孤病毒科，通過蚊蟲等媒介傳播，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔潰瘍及吞咽困難；鹿流行性出血病則由EHD病毒（EHDV）導致，屬于環(huán)狀病毒屬，癥狀包括高熱、黏膜出血和內臟損傷。這兩種疫病具有高傳染性和潛在的經(jīng)濟損失風險，因此快速、準確的實驗室檢測對疫病防控至關重要。瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）作為一種經(jīng)典的血清學檢測方法，因操作簡便、成本較低，被廣泛應用于病毒抗原或抗體的篩查。
檢測項目
瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）的檢測項目主要包括以下兩類：
1. 病毒抗原檢測：通過特異性抗體與樣本中的病毒抗原結合，形成可見的沉淀線，用于直接確認病原存在。
2. 血清抗體檢測：利用已知病毒抗原檢測動物血清中的特異性抗體，評估感染狀態(tài)或免疫應答水平。
針對茨城病和鹿流行性出血病，需分別使用對應病毒的已知抗原或高免血清作為反應試劑，確保檢測的特異性。
檢測儀器與試劑
AGID試驗的核心儀器與試劑包括：
- 瓊脂糖凝膠板：通常使用1%-2%的瓊脂糖溶液，以pH 8.6的緩沖液（如Tris-EDTA）配制。
- 微量加樣器及打孔器：用于精確加樣和制備凝膠孔（中央1孔，周圍6孔對稱排列）。
- 病毒抗原和標準陽性血清：需符合OIE（世界動物衛(wèi)生組織）或國家標準的商品化試劑。
- 濕盒及恒溫培養(yǎng)箱：維持37℃恒溫環(huán)境，促進抗原抗體擴散反應。
- 紫外觀察儀或染色設備：輔助沉淀線的識別與結果判讀。
檢測方法與步驟
AGID試驗的標準操作流程如下：
1. 制膠與打孔：將瓊脂糖加熱溶解后倒入平皿，凝固后用打孔器形成中央孔及外周孔（孔徑3-5mm）。
2. 加樣：中央孔加入已知抗原（或抗體），外周孔依次加入待測樣本、陽性對照和陰性對照。
3. 擴散反應：將凝膠板置于濕盒中，37℃孵育24-48小時，使抗原抗體在凝膠中自由擴散并形成復合物。
4. 結果判讀：肉眼觀察或染色后，若待測孔與中央孔間出現(xiàn)清晰的白色沉淀線，則判定為陽性。
檢測標準與質量控制
為確保檢測結果的可靠性，需遵守以下標準：
- 國際標準：參考OIE《陸生動物診斷試驗與疫苗手冊》中關于病毒性出血病的AGID操作規(guī)范。
- 試劑驗證：抗原和抗體的效價需符合說明書要求，每批次試驗應包含陽性和陰性對照。
- 交叉反應排除：茨城病與EHD病毒存在血清學交叉可能，必要時需結合PCR或病毒分離進行確認。
- 結果記錄：沉淀線的清晰度、位置需詳細記錄，模糊或非特異性反應需重復檢測。
通過規(guī)范的AGID檢測，能夠高效篩查茨城病和鹿流行性出血病，為疫病監(jiān)測、免疫評估及防控決策提供重要依據(jù)。然而，該方法靈敏度較低，對早期感染或低濃度樣本可能出現(xiàn)假陰性，臨床中常與其他方法（如ELISA、分子檢測）聯(lián)合使用以提高準確性。
CMA認證
檢驗檢測機構資質認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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