牛傳染性鼻氣管炎病毒實時熒光PCR檢測概述
牛傳染性鼻氣管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis, IBR）是由牛皰疹病毒1型（Bovine Herpesvirus 1, BoHV-1）引起的急性、高度接觸性傳染病，主要導(dǎo)致呼吸道炎癥、繁殖障礙和免疫抑制，對養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。早期快速診斷是控制疫情擴(kuò)散的關(guān)鍵，而實時熒光定量PCR（Real-time PCR）技術(shù)因其高靈敏性、特異性和快速性，已成為IBRV檢測的核心方法。本檢測方法通過特異性引物和探針設(shè)計，結(jié)合熒光信號實時監(jiān)測，可精確定量病毒核酸，為臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查和凈化計劃提供科學(xué)依據(jù)。
檢測項目
本檢測項目主要針對牛傳染性鼻氣管炎病毒（BoHV-1）的核酸進(jìn)行定性或定量分析，具體包括：
1. 病毒核酸檢測：從鼻腔拭子、眼部分泌物、流產(chǎn)胎兒組織或精液中提取病毒DNA；
2. 分型檢測（可選）：區(qū)分BoHV-1的亞型（如1.1和1.2a亞型）；
3. 病毒載量分析（定量檢測）：評估樣本中病毒拷貝數(shù)，用于病程監(jiān)測或疫苗效果評價。
檢測儀器
實時熒光PCR檢測需使用以下核心儀器：
1. 實時熒光PCR儀：如Bio-Rad CFX96、Thermo Fisher QuantStudio系列，支持FAM/HEX/VIC等熒光通道；
2. 核酸提取儀：如QIAGEN QIAcube、MagNA Pure 96，用于自動化提取病毒DNA；
3. 高速離心機(jī)：用于樣本預(yù)處理和核酸純化；
4. 微量分光光度計：如NanoDrop，檢測DNA濃度與純度；
5. 生物安全柜：確保樣本處理過程符合生物安全要求（BSL-2級）。
檢測方法
檢測流程分為以下步驟：
1. 樣本預(yù)處理：采集鼻腔拭子或組織樣本，加入病毒保存液后勻漿離心；
2. 核酸提取：使用商業(yè)化DNA提取試劑盒（如QIAGEN DNeasy Blood & Tissue Kit），按說明書操作；
3. 引物與探針設(shè)計：針對BoHV-1 gB基因保守區(qū)設(shè)計，例如：
- 正向引物：5'-CGACGTACCCACCCAGAAC-3'
- 反向引物：5'-GCGTAGAGGTCGTTGTAGTTG-3'
- 探針：FAM-5'-TGCGGCTCGCCTATGCG-BHQ1-3'
4. PCR擴(kuò)增：反應(yīng)體系含TaqMan Fast Advanced Master Mix，循環(huán)條件為95℃ 20秒，60℃ 30秒（45個循環(huán)）；
5. 結(jié)果判讀：通過Ct值（閾值循環(huán)數(shù)）判定陽性（Ct≤38）或陰性（Ct≥40），38
檢測標(biāo)準(zhǔn)
本檢測依據(jù)以下國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)：
1. OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（2023版）第3.4.7章；
2. GB/T 35910-2018《牛傳染性鼻氣管炎診斷技術(shù)》；
3. ISO/IEC 17025：實驗室質(zhì)量管理體系要求；
4. 陰性/陽性對照：需包含BoHV-1標(biāo)準(zhǔn)株（如Cooper株）和空白對照，確保檢測特異性≥98%，靈敏度≤10拷貝/反應(yīng)。
總結(jié)
實時熒光PCR技術(shù)為牛傳染性鼻氣管炎病毒的早期診斷提供了高效、可靠的手段，結(jié)合嚴(yán)格的實驗室質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，可在感染后24小時內(nèi)完成檢測，顯著提升疫病防控效率。未來隨著數(shù)字PCR等新技術(shù)的應(yīng)用，檢測靈敏度和精確度將進(jìn)一步提升，為養(yǎng)牛業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)保障。
CMA認(rèn)證
檢驗檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實驗室認(rèn)可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號：ISO9001-2024001
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