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馬鈴薯斑紋片病菌檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 03:03:19 更新時(shí)間：2025-05-13 21:43:42

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

馬鈴薯斑紋片病菌檢測(cè)的重要性

馬鈴薯斑紋片病菌（Candidatus Liberibacter solanacearum，Lso）是一種嚴(yán)重危害馬鈴薯及其他茄科作物的病原菌，可導(dǎo)致植株葉片黃化、塊莖內(nèi)部壞死及表皮斑紋等癥狀，對(duì)全球馬鈴薯產(chǎn)業(yè)構(gòu)成重大威脅。該病菌通過(guò)媒介昆蟲(chóng)（如木虱）傳播，具有潛伏期長(zhǎng)、擴(kuò)散速度快的特點(diǎn)。因此，建立快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)體系是防控病害擴(kuò)散、保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。國(guó)際植物保護(hù)公約（IPPC）和各國(guó)植物檢疫機(jī)構(gòu)均將其列為重點(diǎn)管控對(duì)象，要求對(duì)種薯、植株及土壤等開(kāi)展系統(tǒng)性檢測(cè)。

檢測(cè)項(xiàng)目與目標(biāo)

馬鈴薯斑紋片病菌的檢測(cè)主要針對(duì)以下目標(biāo)：
1. 病原菌DNA的存在性檢測(cè)（定性分析）；
2. 病原菌在植株或土壤中的載量測(cè)定（定量分析）；
3. 媒介昆蟲(chóng)帶菌情況的監(jiān)測(cè)；
4. 不同菌株的遺傳分型與致病性研究。

主要檢測(cè)儀器

檢測(cè)過(guò)程中常用的儀器設(shè)備包括：
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（qPCR）：用于高靈敏度檢測(cè)病原菌核酸；
- 核酸提取儀：自動(dòng)化提取植物或昆蟲(chóng)樣本中的DNA；
- 凝膠成像系統(tǒng)：驗(yàn)證PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性；
- 電子顯微鏡：觀察病原菌形態(tài)及寄主組織病理變化；
- 恒溫培養(yǎng)箱：用于病原菌的分離培養(yǎng)（需專用培養(yǎng)基）。

檢測(cè)方法與技術(shù)流程

目前主流的檢測(cè)方法包括：
1. 分子生物學(xué)檢測(cè)：
- 常規(guī)PCR：基于Lso特異性引物（如OA2/OI2c）擴(kuò)增16S rRNA基因片段；
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：采用TaqMan探針技術(shù)提高檢測(cè)靈敏度和定量精度；
- 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）：適用于田間快速篩查。
2. 血清學(xué)檢測(cè)：
- 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：利用單克隆抗體檢測(cè)病原菌表面蛋白。
3. 生物鑒定法：
- 嫁接接種試驗(yàn)：通過(guò)健康植株的病害癥狀表現(xiàn)確認(rèn)病原活性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

國(guó)際及國(guó)內(nèi)主要遵循以下標(biāo)準(zhǔn)：
- 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：ISO 16140系列（微生物檢測(cè)方法驗(yàn)證規(guī)范）、EPPO PM 7/76（Lso檢測(cè)規(guī)程）；
- 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 36851-2018《馬鈴薯斑紋片病菌檢疫鑒定方法》；
- 行業(yè)規(guī)范：種薯生產(chǎn)需符合NY/T 1212-2021《馬鈴薯種薯產(chǎn)地檢疫規(guī)程》要求。

質(zhì)量管控與結(jié)果解讀

檢測(cè)過(guò)程中需設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（Lso標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA）和陰性對(duì)照（健康植株DNA），并通過(guò)熔解曲線分析確保擴(kuò)增特異性。qPCR檢測(cè)中，Ct值≤35且擴(kuò)增曲線呈典型"S"形可判定為陽(yáng)性；ELISA檢測(cè)需滿足OD值≥陰性對(duì)照3倍的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于疑似樣本，建議采用兩種方法交叉驗(yàn)證以排除假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)。