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吸光度比檢測

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發(fā)布時間：2025-07-25 08:49:03 更新時間：2025-07-24 22:10:19

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

吸光度比檢測概述

吸光度比檢測是分析化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域中重要的定量分析方法，通過測量物質(zhì)在特定波長下的吸光強(qiáng)度比值，用于評估樣品純度、濃度及組分比例。其原理基于朗伯-比爾定律，當(dāng)單色光通過溶液時，吸光度與溶液濃度和光程長度成正比。該技術(shù)憑借操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于DNA/RNA純度分析、蛋白質(zhì)濃度測定、酶活性檢測以及環(huán)境污染物監(jiān)控等領(lǐng)域。特別是對于復(fù)雜樣品體系，吸光度比檢測能有效消除背景干擾，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

檢測項目

常見檢測項目包括：1）核酸純度檢測（A260/A280比值）；2）蛋白質(zhì)含量測定（A280/A260比值）；3）酶促反應(yīng)進(jìn)程監(jiān)測（特定底物/產(chǎn)物吸光比）；4）重金屬離子檢測（絡(luò)合物特征吸收峰比值）；5）藥品輔料分析（主成分與雜質(zhì)吸收比）。不同檢測項目需選擇對應(yīng)的特征吸收波長組合，例如DNA純度檢測采用260nm與280nm雙波長體系。

檢測儀器

核心檢測設(shè)備為分光光度計，具體包括：1）紫外-可見分光光度計（波長范圍190-1100nm）；2）微量分光光度計（適用于μL級樣品）；3）多通道酶標(biāo)儀（高通量檢測）。高端儀器配備溫控模塊和自動進(jìn)樣系統(tǒng)，可滿足ASTM E275-08等標(biāo)準(zhǔn)要求的精確控溫需求。儀器需定期使用重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行吸光度線性驗證。

檢測方法

標(biāo)準(zhǔn)檢測流程包含以下步驟：1）樣品制備與適當(dāng)稀釋；2）設(shè)置檢測波長參數(shù)；3）使用空白溶液進(jìn)行基線校正；4）樣品吸光度三次重復(fù)測量；5）計算目標(biāo)波長吸光比值。以DNA檢測為例，A260/A280比值1.8-2.0表明高純度DNA，低于1.8提示蛋白質(zhì)污染。實驗需嚴(yán)格遵循ISO 11348-1:2007規(guī)定的比色皿清洗規(guī)程，確保光程一致性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

主要參考標(biāo)準(zhǔn)包括：1）USP<857>紫外-可見分光光度法；2）ISO 11348-1:2007水質(zhì)檢測標(biāo)準(zhǔn)；3）中國藥典2020年版0401分光光度法；4）ASTM E275-08分光光度計性能驗證標(biāo)準(zhǔn)。實驗數(shù)據(jù)需滿足RSD≤1%的重復(fù)性要求，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2≥0.995。對于關(guān)鍵檢測項目，應(yīng)通過CNAS認(rèn)證實驗室的比對驗證，確保檢測結(jié)果的可追溯性和國際互認(rèn)性。