Bmp5短耳小鼠動物模型(B6.Cg-Bmp5se)

1. Bmp5短耳小鼠繁殖

用同窩的雄性和雌性交配獲得雜合小鼠，得到后代沒有產生突變的小鼠，這些小鼠也未發(fā)現(xiàn)外耳短小畸形，將雜合小鼠互相再雜交，根據(jù)實驗需要陸續(xù)獲得Bmp5短耳小鼠孕鼠，這些孕鼠可以檢測出純合型、雜合型和野生型胎鼠。該純合型小鼠是可以生育的，但是純合型相互交配會得到只有純合型的后代，最好的繁殖策略還是雜合小鼠互相雜交。

2. Bmp5短耳小鼠的基因點突變檢測

DNA測序：設計引物進行Sanger法測序，應用試劑盒法裂解鼠尾提取DNA洗脫出的DNA于-20℃保存。通過引物3在線平臺(http://primer3.ut.ee/)設計候選變異引物，引物序列如下：Bmp5正向引物為GGAGGCATTACAAAGAGTTTCG，反向引物為GAACCATTTCACCAGCTCCT。聚合酶鏈式反應(PCR)反應體系：金牌Mix(green)27μl，正向引物1μl，反向引物1μl，模板DNA 1μl，擴增產物由擎科生物技術有限公司進行測序。

Bmp5短耳小鼠野生型（上）、雜合型（中）和純合型（下）的測序峰圖，Bmp5點突變位置在外顯子2倒數(shù)第7個堿基，堿基由C突變?yōu)門。