6周齡C57BL/6J雄性小鼠， 16-18 g。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  選擇40 只健康雄性C57BL /6 小鼠，體質(zhì)量16-18 g，均購(gòu)于北京唯尚立拓科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京) 2016-0009，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所動(dòng)物房?jī)?nèi)，5只/盒，溫度( 22±2) ℃，濕度50% ～ 60%，12 h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水。

1.2儀器與試劑  1）全自動(dòng)生化分析儀用于檢測(cè)三酰甘油( triglyceride, TG) 、總膽固醇( total cholesterol, TC) 、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL) 等生化指標(biāo)。2）石蠟包埋機(jī)( LEICA)。3)高脂飼料主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量：60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白質(zhì)

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備  采用高脂飲食誘導(dǎo)NAFLD模型，造模用飼料貨號(hào)為MD12033( 60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白質(zhì)) ，購(gòu)自江蘇美迪森生物有限公司，持續(xù)造模12周，并在第6 周、9周和12 周分別進(jìn)行糖耐量和胰島素耐量測(cè)定，檢測(cè)模型小鼠是否發(fā)生糖耐量受損，從而判斷模型進(jìn)展。

2.2 標(biāo)本采集及處理 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱取小鼠體質(zhì)量，用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥位置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，固定四肢，脫毛后暴漏胸腹部，采用腹主動(dòng)脈采血方法。室溫靜置30 min后，3,000 rpm，4°C離心15 min，分離血清，測(cè)定血脂水平。解剖小鼠腹腔，肉眼觀察肝臟大體形態(tài)，在肝右葉同一位置切取1 塊0.5 cm × 0.5 cm ×0.3 cm肝組織，濾紙吸干后稱質(zhì)量，其中一塊進(jìn)行及時(shí)冰凍切片，用于油紅O染色。其余肝組織分裝于1.5 mL 離心管中，-80℃低溫保存。