C57BL/6J小鼠

（1）轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建：以人PSGL-1的mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得人PSGL-1的cDNA，將其插入pCDNA3.1(+)載體的啟動(dòng)子下游，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體。載體經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證正確后，將其線性化并經(jīng)顯微注射到C57BL/6J的受精卵中，用129做假孕受體，制備轉(zhuǎn)基因小鼠。轉(zhuǎn)基因小鼠提取鼠尾DNA進(jìn)行基因鑒定（h-PSGL-F: 5’-CTACCAAAAGAGGTCTGTTC-3’；h-PSGL-R: 5’-ATGAGATGCAGACCATCTCG-3’），采用RT-PCR法檢測(cè)組織內(nèi)基因表達(dá)情況（h-PSGL-CF: 5’-GTGGTGCTGGCGGTCCG-3’；h-PSGL-CR: 5’-CAGGCCCCCATTGGCTGTG-3’），并用兔抗人PSGL-1的多克隆抗體檢測(cè)組織內(nèi)蛋白表達(dá)情況。

（2）病毒制備：使用的臨床分離株包括：1.FY0805a，2008年分離自安徽省阜陽市，GenBank存儲(chǔ)號(hào)為HQ882182；2.JK2009,2009年分離自重慶市，GenBank存儲(chǔ)號(hào)為HQ694982；使用的小鼠適應(yīng)株為MP10，為FY0805a在小鼠體內(nèi)連續(xù)傳代10次后的小鼠適應(yīng)株，GenBank存儲(chǔ)號(hào)為HQ712020。EV71在人橫紋肌瘤細(xì)胞（RD）中培養(yǎng)、繁殖，采用三次凍融法釋放病毒，超速離心法富集病毒，病毒儲(chǔ)存于超低溫冰箱中，病毒儲(chǔ)存液濃度為1×109 TCID50/ml。

（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：可使用SPF級(jí)別的10日齡乳鼠，品系為C57BL/6J-TgN(CMV-Homo-PSGL-1) -ZLFILAS，母鼠自然哺乳，在動(dòng)物生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)獨(dú)立飼養(yǎng)。

（4）病毒感染：根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定感染劑量，10日齡乳鼠經(jīng)輕度麻醉后，經(jīng)腹腔注射1×108 TCID50 的EV71JK2009,攻毒體積為100微升/只；小鼠適應(yīng)株EV71 MP10的感染劑量為5×106 TCID50，注射體積為100微升/只，空白對(duì)照組注射等量RD細(xì)胞上清。