MERS感染的恒河猴、狨猴動(dòng)物模型成本較高、操作復(fù)雜，制約其在實(shí)驗(yàn)中大規(guī)模使用。建立一個(gè)經(jīng)濟(jì)實(shí)用的小動(dòng)物模型作為靈長類模型的有益補(bǔ)充非常必要。BALB/c小鼠由于其良好的性能（遺傳背景均一、個(gè)體差異小等優(yōu)點(diǎn)）已被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究。然而BALB/c小鼠缺乏MERS-CoV的受體DPP4( 亦稱CD26)，自然情況下是不能被感染的。

利用不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)SPF級(jí)雌性BALB /c小鼠后建立MERS-CoV感染的動(dòng)物模型。

MERS-CoV (hCoV-EMC，GenBank: MH454272.1）由荷蘭伊拉斯姆斯大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Ron Fouchier 教授饋贈(zèng)。Ad5-DPP4 由美國愛荷華大學(xué)微生物與兒科學(xué)教研室趙金存教授饋贈(zèng)。

DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠在MERS-CoV 攻毒前，滴鼻轉(zhuǎn)導(dǎo)Ad5-DPP4。高劑量DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組轉(zhuǎn)導(dǎo)劑量為2.5×10⁸ PFU/50μl/只，低劑量DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)組轉(zhuǎn)導(dǎo)劑量為0.5×10⁸ PFU/50μl/只，PBS 對照組鼻腔滴入50μl PBS。DPP4 轉(zhuǎn)導(dǎo)處理后5 天，進(jìn)行MERS-CoV 滴鼻攻毒，攻毒劑量為5×10⁵TCID₅₀/50μl/只。觀測臨床癥狀和死亡情況。動(dòng)物安樂死后，取肺組織制備病理標(biāo)本，進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。剩余3只進(jìn)行肺灌洗，用于病毒滴度和病毒載量測定。感染后14天，取血，分離血清用于IgG抗體和中和抗體檢測。

1、不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)后MERS-CoV感染小鼠體征

MERS-CoV攻毒后，各組小鼠均無死亡。但DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均出現(xiàn)了明顯的感染癥狀，主要表現(xiàn)為精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、活動(dòng)少、扎堆等（圖1A）。高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠較低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠癥狀更為明顯，持續(xù)時(shí)間也較長。PBS對照組小鼠無任何臨床癥狀。攻毒后DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均出現(xiàn)明顯的體重下降，高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠體重下降更為明顯。高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠攻毒5d后體重開始恢復(fù)，而低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠攻毒3d后體重開始恢復(fù)。而對照組小鼠體重變化不明顯（圖1B）。

圖1 小鼠MERS-CoV攻毒后臨床癥狀

（A：表型觀察；B：MERS-CoV攻毒后體重變化）

2、不同劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)后MERS-CoV感染小鼠的病理學(xué)檢查

MERS-CoV感染后3d，大體解剖可見兩種劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺部均有不同程度充血呈暗紅色，而對照組小鼠肺部無明顯變化（圖2）。且高劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺部病變面積明顯大于低劑量DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠。顯微病理檢查可見DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠均發(fā)生間質(zhì)性肺炎，表現(xiàn)為肺泡隔中度到重度增寬，肺組織中可見少量到多量炎性細(xì)胞浸潤和漿液性滲出，炎細(xì)胞以巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主。而對照組小鼠無此變化（圖3A）。免疫組化分析表明DPP4轉(zhuǎn)導(dǎo)組小鼠肺組織中可檢測到病毒蛋白的表達(dá)，陽性細(xì)胞主要分布在肺組織的支氣管上皮細(xì)胞中。對照組小鼠肺中并未檢測到病毒特異蛋白的存在（圖3B）。

圖2 小鼠肺大體解剖圖（三角：正常肺組織；箭頭：肺部充血）

 

檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書

證書編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書

證書編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書

證書編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

鐵鍋檢測 狗糧檢測 膩?zhàn)臃蹤z測 燈具檢測 衣服檢測 乳膠漆檢測 爐渣檢測 石灰石檢測 切削液檢測 膠水檢測 聯(lián)系我們 壓力表檢測 瓷磚檢測 輪胎檢測 藥品檢測要去哪里 材料檢測 中科光析科學(xué)技術(shù)研究所簡介 家具檢測 油品檢測 吸濕性測定 乳膠漆檢測 石灰石檢測 切削液檢測 膠水檢測 儲(chǔ)油罐檢測

下一篇： hCoVEMC（MERSCoV）經(jīng)氣管途徑感染恒河猴模型 上一篇： hCoVEMC（MERSCoV）經(jīng)氣管途徑感染狨猴模型

關(guān)于我們

部分儀器

合作客戶

中析研究所首頁 關(guān)于我們 檢測儀器 檢測資質(zhì) 聯(lián)系我們

全國熱線：400-635-0567

投訴電話：010-82491398

地址：北京市豐臺(tái)區(qū)南三環(huán)西路16號(hào)2號(hào)樓27層

山東分部：山東省濟(jì)南市歷城區(qū)唐冶綠地匯中心36號(hào)樓

企業(yè)郵箱：010@yjsyi.com

掃一掃，更多精彩

北京前沿科學(xué)技術(shù)研究院 官方微信公眾號(hào)

中析研究所 官方抖音

中析研究所 官方微信公眾號(hào)

中析研究所 官方快手

中析研究所 官方微視頻

中析研究所 官方小紅書